脾脏单细胞的采集

脾脏单细胞的采集

脾脏作为生物体最大的储血器官，富含免疫细胞，是流式实验的理想样本来源。但其组织结构需通过机械解离制备单细胞悬液。

脾脏处理步骤

1. 将脾脏转移至35mm无菌培养皿中。加入5mL RPMI 1640基础培养基（用于细胞分选实验）或含1mM EDTA的PBS（用于非分选实验）。

2. 去除脾脏表面的结缔组织和脂肪，检查脾脏是否有肿大、变色或病变，记录样本状态以便后续分析。

3. 使用5mL无菌注射器的扁平末端，轻轻画圆碾磨脾脏，直至无明显红色结团，释放脾细胞。注意操作轻柔，避免细胞过度损伤。

4. 将70μm细胞过滤器置于15或50mL锥形管上，用2mL培养基润洗滤网，减少细胞黏附。

5. 用5mL或10mL移液管将脾细胞吹打均匀，转移至润洗过的过滤器中。

6. 继续用注射器扁平末端在滤网上轻柔碾磨，辅助细胞通过，用3mL培养基冲洗滤网。

7. 离心收集细胞（500g，5分钟），弃上清，轻轻敲击试管重悬细胞团。

注意：碾磨力度需适中，过度用力可能导致细胞破损，影响活性。过滤后及时离心，避免细胞长时间悬浮造成损伤。

来源：网络整合

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