干货 || 活细胞表面抗原的荧光染色（间接免疫荧光）

【材料与仪器】
细胞 PBS 溶液；叠氮化钠 
【步骤】
1. 在培养皿中加入 1 mmol/L EDTA 1 mmol/L EGTA 的 PBS 溶液，收获细胞。此程序 比通常的胰蛋白酶消化时间长。4°C 1000g 离心 5min。操作始终在冰上进行。
2. 用 4 ml PBS+0.1% 叠氮化钠和 1% BSA 或热的灭活血清洗细胞。
3. 计数细胞，每个样品的最小浓度为 1×106 /ml。
4. 将样品等分为 50 ul 小体积的含 0.1% 叠氮化钠和 1% 热的灭活血清的 PBS 溶 液。
5. 加合适滴度的初始抗体，用系列稀释确定合适滴度范围。
6. 在冰上孵育细胞 30 min。
7. 每个样品中加入 4 ml PBS+叠氮化钠和 BSA，轻轻混合。
8. 1000g 离心细胞 5min。
9. 用 4 ml PBS+叠氮化钠和 BSA 洗样品。
10. 1000g 离心细胞 5min。
11. 在适当体积的 PBS+叠氮化钠中重悬细胞。
12. 加合适滴度的次级抗体，用与起始滴度相近的范围确定所需量。
13. 在冰上孵育细胞 30 min。
14. 每个样品中加入 4ml PBS+叠氮化钠和 BSA，轻轻混合。
15. 1000g 离心细胞 5 min。
16. 在相近体积的 PBS+叠氮化钠和 BSA 中重悬细胞，终浓度为 1×106~5×106 /ml。

免责声明：本文内容仅供读者学习和交流。文章、图片等版权归原作者享有，如有侵权，请留言联系。